溃疡性结肠炎（UC）是一种病因错综复杂的肠道炎症性疾病。近年来，UC的发病率在全球范围内急剧攀升，且呈现逐年加剧的态势。该疾病的病理变化主要集中在肠黏膜及其下层组织，好发于乙状结肠与直肠区域，病情严重时可波及降结肠乃至整个结肠系统。UC患者常表现出腹痛、腹泻等一系列典型症状。鉴于此，制定并实施旨在强化肠道屏障功能、削弱病原微生物侵袭能力以及遏制炎症反应的策略，构成了UC治疗过程中的核心与关键。
止痢宁方(ZLN)，具备显著的清热利湿与行气止痛之功效，由穿心莲(AH)、苦参(SFR)及木香(AR)精心配伍而成。其制剂形式——止痢宁片，在临床医学实践中，已被广泛应用于肠炎与痢疾的治疗领域。据现有研究成果揭示，AH、SFR与AR三味药材在协同作用下，对于缓解并改善结肠炎症状展现出明确且积极的效果。尽管ZLN在UC的临床治疗中已取得了令人瞩目的疗效，然而，关于其确切的疗效机制及更深层次的作用原理，目前仍处于探索与研究阶段，尚待进一步的科学验证与阐明。
近日，一篇名为“Zhilining Formula alleviates DSS-induced colitis through suppressing inflammation and gut barrier dysfunction via the AHR/NF-κBp65 axis”的论文探讨了ZLN对DSS诱导的结肠炎的相关治疗作用。
图1 论文首页
ZLN改善了DSS诱导的UC
该研究深入探讨了ZLN对DSS诱导的UC小鼠模型的影响（图2A）。结果显示，相较于对照组，模型组小鼠展现出显著的体重减轻趋势，DAI（疾病活动指数）评分显著升高，且结肠长度明显缩短（图2B-E）。但接受ZLN治疗的结肠炎小鼠，其上述症状均得到了显著改善（图2B-E）。此外，ZLN还显著降低了DSS诱导的MPO（髓过氧化物酶）水平，进一步证实了ZLN在缓解DSS诱导的结肠炎结肠组织损伤方面具有积极作用（图2F）。研究还观察到，与对照组小鼠（对照+ZLN-H）相比，ZLN治疗并未引发任何副作用，且高剂量ZLN对正常小鼠的体重、DAI评分、肝脏指数及MPO水平均未产生显著影响（图2），从而有力证明了ZLN的安全性及其对DSS诱导小鼠模型的药理效应。
图2 ZLN改善了DSS诱导的UC
ZLN保护结肠炎小鼠结肠组织，抑制炎症反应
HE染色结果显示，模型组小鼠的结肠上皮隐窝出现严重缺失，并伴有结肠组织的显著炎症细胞浸润，导致较高的组织学评分（图3A）。而ZLN在结肠炎结肠组织中的治疗表现出显著的改善效果，特别是在高、中剂量下，这种改善呈剂量依赖性，包括隐窝坏死、炎症浸润以及组织学评分的减少（图3A）。
为进一步评估ZLN的抗炎作用，研究者检测了血清中促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-18的水平。经ZLN治疗后，这些促炎因子的水平均显著降低（图3B-D）。表明ZLN在减少DSS诱导的小鼠结肠病变和炎症方面具有积极作用。
图3 ZLN可保护结肠炎小鼠的结肠组织，并抑制炎症反应
ZLN改善结肠肠道屏障功能
肠屏障功能障碍是UC的一个显著特征，因此，研究通过AB-PAS染色技术系统地评估了肠屏障的功能状态，并对粘蛋白的生成量进行了严谨的半定量分析。结果显示，DSS刺激显著导致了杯状细胞的显著丢失以及粘蛋白数量的急剧减少（图4A）。值得注意的是，ZLN的干预有效地缓解了这些病理变化。由于ZLN的高剂量与中剂量在改善DSS诱导的结肠炎小鼠症状上展现出相似的疗效，基于疗效最大化与剂量最小化的原则，研究最终选定ZLN-M组样品作为后续实验的研究对象。
此外，研究还深入探究了ZO-1蛋白在肠屏障功能中的关键作用。数据明确显示，DSS组小鼠的ZO-1蛋白表达水平显著降低（图4B）。相比之下，经过ZLN治疗的结肠炎小鼠，其结肠组织中ZO-1蛋白的表达水平得到了显著提升（图4B）。这表明ZLN在保护结肠炎小鼠结肠屏障功能方面的积极作用。
图4 ZLN改善了结肠的肠屏障功能
ZLN抑制NF-κBp65活化，减轻结肠炎炎症反应
研究者基于代谢组学的研究结果深入探讨了ZLN在调节NF-κBp65抗炎机制中的作用。Western blotting结果显示，DSS处理组结肠组织中的IL-1β和TNF-α蛋白水平较对照组显著上升（图5A），这充分表明DSS诱导了强烈炎症反应。而经ZLN治疗后，这些炎症因子的表达水平均有所下降，提示ZLN具有显著的抗炎效果。
此外，研究还对COX-2和IL-17A的表达进行了评估。相较于对照组，模型组中COX-2和IL-17A的mRNA及蛋白表达均显著升高。然而，在ZLN干预后，这两种炎症介质的mRNA及蛋白表达均显著降低（图5B-E），进一步证实了ZLN的抗炎作用。
为探究ZLN的抗炎作用是否与NF-κBp65信号通路相关，研究分别检测了细胞核和细胞质中NF-κBp65的表达水平。Western blot结果显示，在DSS模型组中，细胞核内NF-κBp65表达显著增加，而细胞质内NF-κBp65表达减少，这表明DSS促进了NF-κBp65的核易位，进而激活了NF-κBp65信号通路（图5F）。然而，在ZLN治疗组中，NF-κBp65的核易位被显著抑制，这表明ZLN通过抑制NF-κBp65信号通路的激活来减轻炎症反应。
图5 ZLN抑制NF-κBp65的激活以减少结肠炎的炎症
综上所述，ZLN在抗炎作用及针对结肠黏膜治疗UC方面具有保护作用，这一作用机制与AHR/NF-κBp65轴密切相关，为深入理解ZLN在改善UC方面的作用机制提供了新颖的视角，并为ZLN制剂在临床实践中的应用奠定了坚实的理论基础。
Zhou R, Huang K, Chen S, Wang M, Liu F, Liu F, Lin C, Zhu C. Zhilining Formula alleviates DSS-induced colitis through suppressing inflammation and gut barrier dysfunction via the AHR/NF-κBp65 axis. Phytomedicine. 2024 Jul;129:155571. doi: 10.1016/j.phymed.2024.155571
